Правилна грижа за колоната

Джон Долан

01.08.2008

Пиша тази статия след като се завърнах от двуседмичен престой в Израел. Там водих кратки курсове и отново се убедих, че проблемите в хроматографията не познават национални граници. Едни от най-често задаваните въпроси по време на тези обучения са свързани с почистването и съхранението на обратнофазовите колони за течна хроматография. В настоящата статия ще засегнем три основни въпроса по темата: как се кондиционира нова колона, какъв е ефектът от миене на колоната с вода и препоръки за почистване на колоната след приключване на анализа.

Библиотека ACE - статия #0008

Ролята на метанола и ацетонитрила като органични разтворители в обратнофазовата течна хроматография

Въведение

Ацетонитрилът и метанолът са най-често използваните разтворители в обратнофазовата течна хроматография. Двете вещества имат своите предимства и недостатъци от хроматографска гледна точка, но най-значимото от тях е различната им селиктивност, която ги превръща в ценно средство за разработване на нови методики. В тази статия са сравнени характеристиките на двата разтворителя като UV праг, налягане, сила на разтваряне и е разгледано как модифицирането на органиката може да се използва за разработка на методики.

Библиотека ACE - статия #0001

Определяне на мъртвия обем на HPLC система: теория и практика

Определянето на мъртвия обем на системата за високо ефективна течна хроматография е изключително полезно. Тази статия описва какво теоретично представлява мъртвия обем на една система и как правилно да го определим. Това е необходимо за прехвърлянето на градиентни методи между различни хроматографски инструменти без да се наруши задържането, селективността и резолюцията.

Библиотека ACE – статия #0023

Прехвърляне на градиентни методи чрез инструмента ACE LC Translator

Въведение

Прехвърлянето на градиентни методи в течната хроматография от една колона към друга е често срещана процедура, при която може да се окаже трудно постижимо запазването на селективността при разделянето и резолюцията на пиковете. За да бъде успешно подобно прехвърляне, е необходимо да се вземат предвид основните хроматографски принципи и внимателно да се оцени тяхното влияние. Пропускане на ключови параметри при изчисленията може да доведе до сериозни разлики в селективността или разделителната способност на пренесения градиентен метод. Инструментът ACE LC Translator е лесен за използване калкулатор, който е съобразен с основните хроматографски принципи, включващ всички ключови параметри и изчисления необходими за точното пренасяне на градиентни методи.

Библиотека ACE – статия #0017

Как да определим извънколонната дисперсия и обем

Ширината на хроматографските пикове зависи от различни дисперсионни процеси, които действат както вътре, така и извън колоната. Извънколонният обем – ECV (extra column volume), е сериозен източник на извънколонна дисперсия – ECD (extra column dispersion). Заради него могат да се появят негативни последици, които да доведат до загуба на ефективност на колоната, а от там и до загуба на резолюция. В тази статия е засегната темата как лесно можем да определим и измерим показателите ECV и ECD.

Библиотека ACE – статия #0015

Как да определим мъртвия обем и порьозността на колоната

Измерването на вътрешния мъртъв обем на аналитичната колона за течна хроматография е полезно за различни приложения като: определяне на времето за постигане на равновесно състояние на колоната, настройка на обема на инжектиране, правилна настройка на градиентно елуиране и т.н.

Селективност при обратнофазовите LC разделянията Част III: Селективност чрез вида на колоната

01.03.2011 от Джон У. Долан

LCGC Северна Америка / Том 29, брой 3, стр. 236–244

Как да изберем друга колона, за да се опитаме да решим даден проблем с разделянето.

В първите две части от тази серия, разгледахме различни фактори, които влияят на селективността при разделянето с обратно фазова течната хроматография (LC). Първо, видяхме някои от ползите при промяна на типа разтворител (1), например промяна от метанол към ацетонитрил или тетрахидрофуран. След това разгледахме как промяната в силата на разтворителя (2) - процентът органика в подвижната фаза, може по лесен начин да направи корекция и да се разделят проблемните двойки пикове. Този месец "LC Troubleshooting" ще се фокусира върху друга известна техника, използвана за увеличаване на разделянето между пикове в хроматограмата: преминаване от един към друг тип колона.

Избор в течната хроматография при разделяния с обратна фаза, част II: Селективност на силата на разтворителя

01.01.2011

От Джон У. Долан / LCGC Северна Америка

Том 29, брой 1, стр. 28–34

В част I на "LC Troubleshooting " за избор в течната хроматография при разделяния с обратна фаза, се акцентира върху селективността, произтичаща от типа разтворител (1) - т.е. как замяната на един органичен разтворител с друг в подвижната фаза влияе върху разделянето и селективността при течната хроматография (LC) с обратна фаза. Замяната на органични разтворителите е мощно средство за различно елуиране на аналити в хроматограмата и не бива да се пренебрегва като ценен инструмент за развитие на метода. Въпреки това, често може да се получи желаната промяна в селективността по-прост начин - чрез промяна на силата на разтворителя.

Селективност в обратна фаза течнохроматографски разделяния - част I: селективност на разтворител

 01 декември 2010 година От Джон У. Долан

LCGC Северна Америка Том 28, брой 12, стр. 1022–1027

През 70-те години Rohrschneider прави задълбочено проучване на свойствата на различни разтворители (1). Наред с други неща, той показа, че в някои случаи, когато два разтворителя са смесени, могат да се получат свойства на трети разтворител. Това предполага, че някои подгрупи от всички възможни разтворители могат да се използват за химически цели. Приблизително по същото време, Лойд Снайдер се интересува от различните свойства на разтворителя, които са важни при разделянето в течната хроматография (LC), особено разделяне с обратна фаза

Кога се нуждаем от Sub-2-μm повърхностно порести частици за разделяне в течната хроматография?

Повърхностно порести частици (SPPs)  и  Напълно порьозни частици (FPPs)

01 юли, 2018

От Дейвид С. Бел, Ландън Уист, Шун-Хсин Лян, Дан Ли

LCGC Северна Америка / Том 36, брой 7, стр. 436–439

Използването на повърхностно порести частици (SPPs) в съвременната високоефективна течна хроматография (HPLC) е много често срещано явление. Първоначално SPPs се въвеждат като алтернатива на напълно порьозните частици (FPPs). През последните години много производители на колони са разработили 2-µm и по-малки SPP-базирани продукти. Тази статия изследва практическата полза от тях.

Смесване и смесители в течната хроматография - защо, кога и колко? Част I – помпата

От Dwight R. Stoll / LCGC Северна Америка
Том 36, брой 10, стр. 746–751

Какви типове смесители са необходими при различни типове LC помпи? Необходими ли са различни смесители за различни приложения?

В някои теми, за които съм писал през изминалата година, аз се опитах да насоча вниманието към аспектите на нашата практическа работа с LC, които според мен често са недооценени - например стойността на използването на вградени филтри за мобилна фаза и най-добрите практики за намаляване на замърсителите при използване на LC – MS.

Фитинги и връзки за течна хроматография - толкова много възможности!

Dwight R. Stoll / 01 май, 2018

LCGC Северна Америка / Том 36, брой 5, стр. 304–311

В практиката ми, когато обучавам хора с по-малко опит в течната хроматография (LC), било то в промишлеността или в академичните среди, откривам, че едно от най-големите предизвикателства, пред което се изправям, е да накарам хората да оценят важността на доброто флуидно свързване в техните системи за LC. Добрите флуидни връзки са най-важни по пътя на потока от точката на впръскване на пробата от инжектора до точката на детектиране на аналита, включително връзките с инжектора, колоната, колонния термостат и детектора.

Важната роля на празните проби при пробоподготовката

От Дъглас Е. Рейни

LCGC Северна Америка / 36, бр. 8, стр. 494–497

Когато преподавам курс по инструментален анализ, един от любимите ми експерименти е, когато учениците получат бутилка тоник, а след това изследват урината след консумацията му. Използва се течно-течна екстракция, за да се определят нивата на уринарен хинин чрез флуоресцентна спектроскопия.

Въведение в Газовата Хроматография

   Газовата хроматография е често използван метод в индустриални и изследоваделски лаборатории за качествено и количествено определяне на различни химични вещества, намиращи се в някаква смес. Детектирането на много малки количества прави този метод предпочитан за контролиране на замърсявания в околната среда, както и използването му в съдебни, допинг лаборатории. Анализираните проби трябва да притежават достатъчна температурна стабилност и летливост.

Седем неща, които не трябва да правим в HPLC лабораторията

Джон Долън

Jan 01, 2015 - LCGC North America (Vol. 33, 1, 18–22)

Докато провеждам обучения по течна хроматография в целия свят, никога не спирам да се изненадвам с някои от най-креативните практики, въвеждани от студентите, които могат да доведат до проблеми с хардуера на HPLC системите или с аналитичния метод. Някои от тях могат да бъдат класифицирани като хроматографски НПТ (Не Правете Това) и поради това бих искал да споделя седем от тях в това издание на рубриката „LC Troubleshooting“. Разглеждайте ги като предпазни мерки, съобразяването с които би направило практиката ви в лабораторията далеч по-приятно изживяване. Те не са представени или класирани по значимост.

Топ 10 митове за HPLC и UHPLC колони: Част II

В тази втора част на статията "Топ 10 митове за HPLC и UHPLC колони" се коментират останалите 5 мита, свързани с колоните за течна хроматография, и се излагат причините за тяхната несъстоятелност.

Топ 10 митове за HPLC и UHPLC колони: Част I

Роналд Мейджърс

LCGC North America / Volume 31, Issue 7 / 22. 08.2013

Речника Webster's New Collegiate Dictionary дефинира думата мит като "необосновано вярване, прието безкритично, особено от заинтересована група". Възможно ли е, това да бъде група от неинформирани хроматографисти? В статията на Рон Мейджърс са представени топ 10 митовете, свързани с колоните за течна хроматография, като се правят опити тези митове да бъдат демистифицирани, предлагайки някои доказателства за тяхната неистинност. Тази първа част включва митове от номер 10 до номер 6.

Подвижната фаза във HPLC – 10 вредни навика, които трябва да избягвате

1. Измервате рН на подвижната фаза след прибавянето на органичния компонент

pH – метрите са калибрирани, за да отчитат правилно стойността на рН във водни разтвори, и буферите, с които ги калибрирате, също са водни. Ако измерите рН на подвижната фаза след прибавянето на органичния разтворител, то тази стойност ще бъде различна от тази, която ще получите, ако измерите рН само на водния буфер.

Какво трябва да знаем за рН буферите? Как да ги използваме и при каква концентрация?

Защо рН е важен параметър в течната хроматография?

За някои хроматографски разделяния ефекта от промяната на рН на подвижната фаза е минимален. Но за киселинни и базични молекули ефекта върху разделянето дори при малки промени в рН е значителен. Промяната на рН води до промяна на степента на йонизация на молекулите в разтвора. По този начин се променя тяхната полярност, и като следствие се променят техните времена на задържане при HPLC разделяне.

Избор на колона за течна хроматография

Избирането на правилна колона е важно решение, но, поради огромното разнообразие от предлагани на пазара продукти, изборът не винаги е лесен. Целта този базисен справочник е да бъдат подчертани факторите, които трябва да бъдат взимани предвид, когато купувате колона и по какъв най-добър начин да бъде стеснен широкия кръг от възможности сред HPLC колоните на пазара.

Градиентно елуиране. Част I - Интуиция

За разлика от изократните разделяния, градиентното елуиране понякога може да изглежда неинтуитивно. Въпреки, че от подходяща перспектива, нещата, които интуитивно разбираме за изократните методи, важат по сходен начин и за градиентите.

Избягване на проблеми при работа с рефрактометрични детектори

Детекторът по индекс на пречупване (RI)е уникален сред останалите широко използвани детектори за течна хроматография (ТХ), тъй като е наистина универсален със своите възможности за детектиране.